实验室干热灭菌法
一、干燥灭菌法
灭菌条件为：160℃维持2小时；170℃维持1小时；180℃维持30分钟；高温下可达灭菌要求。
适用于易被湿热损坏和在干燥条件下使用更方便的物品（如金属、玻璃、陶瓷及凡士林纱布条等）灭菌。由于其对烤箱要严格要求（国内产的烘箱质量都有点悬），
且大功率、高温下危险系数较大，一般不建议使用！特殊情况下，如需要灭活器械、容器中对于温度超级稳定的RNase时，才考虑使用。
干热灭菌法的注意事项：
1.对灭菌对象的理化性质有一定了解，明确对象在高温下的稳定性；
2.对设备的情况、参数有清醒认识，了解设备的温度设计上限；
3.专项供电，确保接入电路足够负荷；
4.灭菌过程中，相关人员要实时在岗监管，不得离岗，如遇特发情况及时切断电源！
二、过滤除菌法
过滤除菌法（Sterilization byfiltration） 是用物理阻留的方法将液体或空气的细菌除去，以达到无菌目的。
常用于对热不稳定液体试剂的灭菌。一般来说孔径为0.22μm的微滤膜即可有效地去除微生物达到除菌的目的，但该孔径下无法去除体积极小的支原体或病毒颗粒。
因此如果需要去除这些物体，就需要使用孔径更小的纳滤膜(孔径可达20 -50nm )。由于滤膜孔径的大小和过滤的流速呈反比，因此我们通常在小孔径滤膜之前使用
大孔径的滤膜进行预过滤，从而防止微孔被过早的堵塞，保证过滤通畅进行，进而获得更高的得率。在过滤除菌过程中要求过滤装置和滤膜自身必须无菌。因此我们
可以选择购买已经无菌预处理的一次性使用装置（如Millipore的一次性针头滤器），也可以选择自行无菌处理，目前市售的滤膜通常可以采用高压灭菌法除菌。
注意事项：
在正式过滤前，必须进行过滤系统的密闭性和滤膜的完整性测试。过滤过程要在等级A的洁净室内进行（通常可在超净台完成）。
三、紫外线灭菌
紫外线的定义是波长在10纳米到400纳米之间的电磁辐射。不过在实际应用中，使用的波长一般在100纳米以上。波长在315到409纳米之间的UVA通常可以把皮肤晒黑，
波长280到315纳米的UVB可以灼伤皮肤并增加皮肤癌风险，波长在200到280纳米的UVC可以有效地杀灭细菌和病毒，而波长在100到200纳米之间的紫外线会被空气中的氧
气吸收，所以只能在真空中或者至少是完全无氧的环境里工作，也就不适合用于现实杀菌了。传统的紫外杀菌选用254纳米的波长。
当紫外线被细菌或者病毒吸收之后，就会破坏DNA，从而使它们失去增殖能力。就杀菌结果而言，跟加热或者用化学物质处理是一样的。
紫外杀菌的能力除了跟波长有关，还取决于灭菌物被辐射到的能量。在选定的254纳米波长下，杀菌效果跟能量强度呈现一个拉伸过的S型。也就是说，在低能量下，杀菌
效果很差，这是因为细菌或者病毒跟人体一样，对于DNA损伤有一定的修复能力。在照射能量低的时候，损伤的DNA被及时修复，细菌和病毒就能够继续增殖下去。当能量高
到一定程度，DNA修复系统实在忙不过来了，DNA损伤急剧增加，宏观上表现出来就是细菌或病毒被“杀死”了。超过这个能量强度，每增加一点，灭菌能力都会大大增加。
但是增加到一定程度，就进入第二个平台——再继续增高能量，杀菌效果增加得也很少。这个灭菌效果上的“尾巴”可能是源于一部分微生物对于紫外线攻击很顽强，也可
能源于有一部分被处理样品无法被照射到。
因为这个“尾巴”的存在，紫外杀菌难以实现加热或者化学杀菌剂那么彻底的杀灭。通常把降低4个对数值作为“灭菌标准”，也就是还有万分之一的细菌活下来。而鲜牛奶
的巴氏杀菌——在72摄氏度下处理15秒——则通常是降低5个对数值，即最多只有十万分之一的细菌存活。如果降低的对数值是12个以上，几乎就没有细菌能够幸存了。
不同的微生物对紫外线的敏感性不同，有的在较低能量强度下就会被大量杀灭，而有的则需要更高能量才行。以降低4个对数值为标准，研究中检测过的细菌有的只需要每平方
米几十焦耳的能量，有的则需要每平方米300焦耳以上。我们并不知道现实的食物中存在哪些细菌，又各有多少，所以总是把最顽强的那个作为目标，顺便把其他的灭了。因此，
紫外杀菌所用的能量强度需要在每平方米400焦耳以上。各种灭菌技术的灭菌效果都会受到灭菌物理化性质的影响。比如加热或者高压灭菌，温度、酸碱度和压力都会有很大影响。
而在紫外灭菌中，这些因素就不那么重要。紫外杀菌的关键是紫外线能够达到细菌，所以穿透性是关键。诸如灭菌物的组成、固体含量、颜色等因素都会影响紫外线的吸收，从而
影响它穿透的厚度，也就对杀菌效果有很大的影响。如果灭菌物均一、透明，紫外线的穿透性好，灭菌效果就会好；反之，如果灭菌物浑浊，那么紫外线就会被散射，能量在穿透
中降低，灭菌效果就会比较差。总的来说，紫外线的穿透能力比较差，通常也就能穿透两三厘米的厚度。但如果用在某些物质短时间灭菌，效果还是很好的。
注意事项：
1.选择紫外灯时，应该仔细核对型号、适用范围和注意事项。不要进入开启紫外消毒灯的室内。千万不要对着消毒灯验钞或者观察荧光，任何时候都不应该直视紫外灯管。紫外
灯应该尽可能只在封闭空间内小范围使用，并避免不必要的暴露。
2.在使用过程中，应保持紫外线灯表面的清洁，一般每两周用酒精棉球擦拭一次，发现灯管表面有灰尘、油污时，应随时擦拭。
3.用紫外线消毒物品表面时，应使照射表面受到紫外线的直接照射，且应达到足够的照射剂量。